近年来，作为旨在理解复杂的神经网络的方法，应用组织透明化技术对大脑进行三维观察的技术备受关注。

CUBIC（Clear, Unobstructed Brain/Body Imaging Cocktails and Computational Analysis）是一种组织透明化技术，由东京大学研究生院 医学系研究科 上田泰己老师、顺天堂大学研究生院医学研究科·医学部 洲崎悦生老师共同开发。

 

CUBIC-L, R+（M）Trial Kit由对应第二代CUBIC的4种溶液组成，不仅能够实现小鼠组织（包含大脑）和全身的透明化，还能够使狨猴组织（包含大脑）和全身、甚至是人组织块透明化。通过使用该试剂盒进行样品的透明化，能够精确地收集细胞类型、细胞功能、细胞间连接等信息，可更好地进行解析。与第一代 CUBIC 相比，第二代 CUBIC 提高了透明度。

 

 

◆试剂盒组成

 

试剂名称	规格	试剂用途
CUBIC-L Solution	125mL×2	脱脂、脱色
CUBIC-L R+（M）Solution	125mL×1	调整折射率
Mounting Solution 1	40mL×1	观察样品用
Mounting Solution 2	40mL×1	观察样品用

 

 

◆操作概要

 

以下是小鼠全脑及组织的透明化步骤。根据样品的大小和种类不同，最合适的实验方案会有所差异。

 

工序	试剂	温度	时间
摘除内脏、灌注固定
抽血	D-PBS	4°C	<5min
灌流	4% PFA	4°C	<5min
固定	4% PFA in PBS	4°C	12-24 hrs
脱脂、脱色
清洗	0.01% NaN3 in PBS	RT	>2 hrs×2
前期置换	50% CUBIC-L Solution	37℃	>6 hrs
脱脂、脱色	50% CUBIC-L Solution	37℃	2-5 days
清洗
清洗	PBS	RT	>2 hrs×3
折射率调整
前期置换	50% CUBIC-R+（M）Solution	RT	>6 hrs
折射率调整	50% CUBIC-R+（M）Solution	RT	过夜
	CUBIC-R+（M） Solution	RT	24 hrs
观察
观察	Mounting Solution

 

 

◆数据

 

小鼠大脑的透明化实例

 

（1）荧光蛋白表达与细胞核染色的组合

 

 

使用本产品对CAG-EGFP Tg小鼠全脑进行透明化处理，并使用专用的染色试剂盒进行细胞核染色（RedDot2）。在光片显微镜下对染色后的样品进行观察。

（本数据由顺天堂大学研究生院医学研究科·医学部 洲崎悦生老师提供）

 

（2）细胞核染色与免疫染色的组合

 

 

使用本产品对B6N小鼠全脑进行透明化处理后，再使用专用的染色试剂盒进行细胞核染色（SYTOX-G）和免疫染色（NeuN-A594）。染色后在光片显微镜下对样品进行观察。

（本数据由顺天堂大学研究生院医学研究科·医学部 洲崎悦生老师提供）

细胞核染色以及免疫组织染色需要使用单独的试剂，详情请与我们联系。

 

 

◆产品列表

 

产品编号	产品名称	产品等级	产品规格
298-85101	CUBIC-L, R+（M） Trial Kit CUBIC-L, R+（M）试剂盒小包装	组织透明化用	1 Kit

 

 

◆相关产品

 

CUBIC Trial Kit

 

FUJIFILM Wako提供第一代CUBIC试剂「CUBIC Trial Kit」，相比第二代CUBIC试剂拥有以下优点：①透明化过程肉眼可见 ②样品处理过程简单，适合透明化的初学者使用。

 

 

（本数据由顺天堂大学研究生院医学研究科·医学部 洲崎悦生老师提供）

 

产品编号	产品名称	产品等级	产品规格
290-80801	CUBIC Trial Kit  CUBIC试剂盒小包装	组织透明化用	1 Kit

 

※ 本页面产品仅供研究用，研究以外不可使用。