【Q and A】色谱柱的清洗和保存

色谱柱在使用前需用流动相置换出厂溶剂，使用后应及时更换为保存溶剂以避免性能下降。

本文将重点介绍色谱柱的清洗维护方法，包括流动相置换要点及如何保存溶剂选择等。

如图1所示，柱内的溶剂通常在使用前、使用中、使用后各不相同，每次都需要置换溶剂。

 ▼柱内溶剂

图1

▼要点

① 首先确认溶剂种类

② 用流动相充分置换HPLC设备后，再连接色谱柱

③ 使用缓冲液作为流动相时，请注意盐类的结晶析出

④ 液体量以柱体积的15～20倍量为参考标准

⑤ 选择性能良好的洗脱样品、且对色谱柱无影响的溶剂

⑥ 当使用缓冲液作为流动相时，请注意盐类的结晶析出

⑦ 通常使用购买色谱柱时封装在内的溶剂

⑧ 不要使用含卤素的溶剂作为保存溶剂

⑨ 色谱柱需紧密密封，避免色谱柱干涸

⑩ 注意色谱柱压力上升

1. 出货时的封存溶剂/保存溶剂置换流动相

方法

柱内封存的溶剂置换为使用的流动相时，其达到平衡所需的液体量会因填料、色谱柱尺寸、检测设备、流动相等而异，可大致以柱体积的15～20倍量作为参考。使用离子对色谱法时，平衡所需时间较长。

注意事项

（1）首先，确认柱内封存的溶剂种类。如果溶剂与流动相互不相溶，请先用能与两者混溶的溶剂置换后，再置换流动相。

　　  请注意色谱柱压力的上升。

（2）当使用缓冲液等作为流动相时，如果柱内是有机溶剂，可能会产生沉淀或结晶，或导致色谱柱性能下降，因此需要考虑预先置换为水。

（3）请将HPLC设备内部（管路）用流动相充分置换后，再连接色谱柱。若未充分置换，可能会混入先前使用的流动相导致色谱柱性能下降。

　　  尤其需要注意进样器的样品环、阻尼器和混合器。

2. 流动相置换为保存溶剂、色谱柱的清洗

方法

请使用能充分洗脱样品且对色谱柱无影响的溶剂等进行清洗并保管。保存溶剂通常使用购买色谱柱时封装在内的溶剂。

注意事项

（1）使用的流动相置换为清洗液时，请注意两者的相互混溶性以及色谱柱压力的上升。

（2）使用缓冲液后，请用蒸馏水冲洗色谱柱以将去除盐分。若直接使用有机溶剂冲洗，可能产生沉淀或结晶，导致色谱柱性能下降。

3. 色谱柱的保存

方法

为防止色谱柱内部产生空隙或裂纹，务必紧密密封，防止干燥。另外，长期保存时，需要每隔1,2个月使液体流通柱内一次，还需要使用具有洗脱能力的溶剂充分清洗柱内，尽可能清除杂质。图2展示了因长期使用等导致色谱柱被污染时的再生方法、色谱柱的清洗方法。另外，表1展示了长期保存时通用的溶剂。

图2. 按填料分类的色谱柱清洗法

注意事项

（1）请不要使用会侵蚀填料和不锈钢管、含卤素等溶剂作为保存溶剂。

（2）频繁清洗或使用过量清洗液冲洗或缩短色谱柱寿命。

以上，通过规范化的清洗、保存操作，可有效维持色谱柱性能并延长使用寿命。

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