试剂怎么用——WB用膜

即使是为同一目的所用的试剂种类繁多，同一物质也会有不同的浓度、纯度、规格。 因此，经常有研究人员向我们问到“不知道哪一种适合自己的实验”等。 为了解决这样的问题，小光老师将介绍一些正确区分使用FUJIFILM Wako品牌试剂的方法。

◆WB用膜

● 硝酸纤维素膜

硝酸纤维素膜是由纤维素羟基经硝酸酯化而形成的，主要通过疏水相互作用进行蛋白的非特异性吸附。因其易于处理并且可以长期储存的特点，一直被作为印迹膜使用。它具有亲水性，因此无需用甲醇进行预处理。但强度较弱，蛋白的结合能力为~100 μg/cm²，比其他膜小，转录时间过长可能会使已转录的蛋白再次游离。

● 尼龙膜

尼龙膜使用了经尼龙或胺化学改性的尼龙。比硝酸纤维素膜具有更好的蛋白结合能力，尤其是经化学改性的尼龙膜带有正电荷，与带负电荷的蛋白发生强烈的静电相互作用。但由于容易发生蛋白以外的非特异性吸附，必须进行充分的封闭处理。

● PVDF膜

PVDF膜是以聚偏二氟乙-烯（PVDF) 为支撑的膜，可通过疏水相互作用吸附蛋白。虽然预处理时需要使用甲醇，但其具有较大的蛋白结合能力、优异的强度和化学相容性，因此经常被用作印迹膜。

膜种类及性质

【要点】 膜孔径

用于Western blotting的膜孔径有0.45 μm和0.2 μm。通常使用的是0.45 μm，但转录15 kDa或更小分子量的蛋白质时，0.2 μm具有更高的结合效率并且可以抑制吸附后的游离。

◆参考文献

1）口野嘉幸，平井久丸，櫻林郁之介 編：「遺伝子・タンパク質 実験操作 ブロッティング法」（ソフトサイエンス社）（1987）．

2）大藤道衛 編：「電気泳動なるほどQ&A」（羊土社）（2005）．

3）森山達哉 編：「バイオ実験で失敗しない！ 検出と定量のコツ」（羊土社）（2005）．